Mel-CAM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401020-ACT

MCAM codifica a Mel-CAM (CD146), uma molécula de adesão da superfamília das imunoglobulinas localizada na superfície celular, que regula interações célula–célula, a dinâmica das junções endoteliais e a remodelação do citoesqueleto. Em tecidos humanos, a Mel-CAM participa de processos ligados à biologia vascular, incluindo ativação endotelial, migração celular e sinalização angiogênica, e pode interagir com vias que controlam sinalização dependente de adesão e permeabilidade. Alterações na expressão de MCAM foram relatadas em múltiplos contextos de doença, sendo frequentemente estudadas em relação à invasividade de células tumorais, comportamento metastático e remodelamento inflamatório da vasculatura. Essas características tornam o MCAM um alvo útil para dissecar mecanismos de adesão, motilidade e comunicação cruzada com o microambiente em modelos celulares relevantes.

Mel-CAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MCAM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mel-CAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MCAM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MCAM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mel-CAM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MCAM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mel-CAM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mel-CAM em células tumorais com expressão de MCAM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.