Plásmido Doble Nickase (m) Mel-18: sc-423764-NIC

Pcgf2 codifica Mel-18, una proteína con dominio RING del grupo Polycomb que actúa dentro de los complejos canónicos PRC1 para regular la compactación de la cromatina y la represión transcripcional mediante la ubiquitinación de la histona H2A y la cooperación con la marca H3K27me3 depositada por PRC2. En células de ratón, Mel-18 contribuye a programas estables de silenciamiento génico que dan forma al patrón del desarrollo, al estado de células madre y progenitoras, y al control del ciclo celular al modular la accesibilidad en loci que especifican linajes. Al influir en redes dependientes de Polycomb, Pcgf2 afecta trayectorias de diferenciación y la memoria epigenética, procesos que con frecuencia se alteran en modelos de transformación oncogénica y desregulación inmunitaria. Por ello, la perturbación genética de Pcgf2 se utiliza para analizar la especificidad de subunidades de PRC1, los cambios en la topología de la cromatina y las salidas transcripcionales dependientes del contexto.

Mel-18 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pcgf2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pcgf2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pcgf2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pcgf2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.