MEK kinase-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404290-ACT

ヒトのMAP3K3はMEKキナーゼ3（MAP3K3）をコードしており、サイトカイン受容体、Toll様受容体、ならびに細胞ストレスからの上流シグナルを統合して、MAPKカスケードを介したシグナル伝達を伝播するセリン/スレオニン型のMAPキナーゼキナーゼキナーゼである。MAP3K3はNF-κBおよびMAPK駆動性の転写プログラムの制御に寄与し、炎症、細胞生存、分化、細胞骨格動態に影響を及ぼす。これらのネットワークを通じて、MAP3K3は血管内皮細胞および免疫細胞の応答に影響し、血管新生シグナルや自然免疫活性化に関連する経路も含まれる。MAP3K3活性の破綻や経路配線の変化は、炎症状態やがん原性シグナル伝達の状況と関連付けられており、機序解明のための経路研究における結節点（ノード）としての有用性を支持している。

MEK kinase-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP3K3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MEK kinase-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP3K3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP3K3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MEK kinase-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP3K3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMEK kinase-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP3K3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMEK kinase-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。