MEK-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402363-ACT

O gene humano MAP2K7 codifica a MEK-7, uma quinase quinase de MAP quinase de dupla especificidade que fosforila e ativa preferencialmente a JNK (MAPK8/9) a jusante de MAP3Ks como ASK1 e TAK1. Essa quinase funciona como um nó-chave na sinalização ativada por estresse, regulando programas transcricionais que controlam apoptose, produção de citocinas, diferenciação e remodelamento do citoesqueleto. A atividade da MEK-7 integra sinais inflamatórios e de estresse oxidativo com a expressão gênica dependente de AP-1, moldando respostas imunes inatas e a tolerância celular ao estresse. A desregulação da sinalização MAP2K7–JNK tem sido implicada em mecanismos relevantes para a plasticidade de células cancerosas, neuroinflamação e biologia do estresse metabólico, tornando-a um alvo útil para mapeamento de vias e estudos de perturbação.

MEK-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP2K7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MEK-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP2K7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP2K7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MEK-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP2K7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MEK-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MEK-7 em células tumorais com expressão de MAP2K7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.