Meis1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401481-NIC

MEIS1はTALEクラスのホメオボックス転写因子をコードしており、PBXおよびHOXタンパク質と協調して、発生過程および成体組織の恒常性維持における系譜特異的な遺伝子発現プログラムを制御します。造血細胞では、MEIS1は幹／前駆細胞の維持、細胞周期制御、分化を調節する転写ネットワークに関与し、クロマチン状態やエンハンサー活性を制御する経路とも連携します。MEIS1の発現異常やエンハンサーの撹乱は、MLL再構成を伴う急性白血病を含む白血病発症と関連しており、その際にHOXAクラスターのプログラムと協調し得ます。MEIS1は心血管および神経発生過程にも関与していることから、複数の臓器系にまたがる転写制御を研究するうえで有用な結節点となります。

Meis1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MEIS1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MEIS1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MEIS1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MEIS1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。