Meis1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401481-ACT

MEIS1は、TALEホメオボックス型転写因子をコードしており、HOXおよびPBXタンパク質と協調的な複合体を形成して、系譜特異化、造血幹／前駆細胞の維持、ならびに発生パターン形成を制御します。Meis1は、細胞周期制御、分化、クロマチン制御に関連する転写プログラム（血液系および神経系の系譜における自己複製と成熟を協調する経路を含む）を調節します。MEIS1の発現異常は、白血病発症や異常な前駆細胞状態の文脈でしばしば研究されており、遺伝学的関連解析からは、MEIS1により制御されるネットワークが神経生物学や睡眠関連形質にも関与することが示唆されています。これらの特徴により、MEIS1は、ヒト細胞モデルにおける転写回路、エンハンサーのロジック、ならびに運命決定を解析するための有用なノードとなります。

Meis1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MEIS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Meis1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MEIS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMEIS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Meis1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMEIS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMeis1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMEIS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMeis1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。