MEIG1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418750-ACT

MEIG1（meiosis expressed gene 1）は、精子形成および減数分裂の進行に関与するとされる、生殖細胞で高発現する小型タンパク質をコードします。男性生殖細胞の分化過程において、転写後段階での遺伝子発現制御に関与する役割が報告されています。精巣では、MEIG1は精子形成（spermiogenesis）に必要なタンパク質複合体の組み立てと輸送に関連づけられており、マンシェット（manchette）に関連したカーゴ輸送や鞭毛の形成などの過程を支えるとされています。MEIG1関連経路の制御異常は、男性不妊や精子形態形成異常の研究において重要であり、その発現が限定的であることから、生殖系列特異的な制御プログラムを解析する上で有用です。ヒトの系において、MEIG1は減数分裂と精子成熟を協調させる転写および転写後ネットワークを検証するための扱いやすい結節点として利用されます。

MEIG1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MEIG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MEIG1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MEIG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMEIG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MEIG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMEIG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMEIG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMEIG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMEIG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。