megalin/LRP2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401094-NIC

LRP2はメガリンをコードする。メガリンはLDL受容体ファミリーに属する大型のエンドサイトーシス受容体で、極性をもつ上皮細胞に高発現し、ビタミン担体、リポタンパク質、ホルモン、シグナル伝達複合体など多様なリガンドのクラスリン依存的取り込みを媒介する。メガリンはアダプタータンパク質や共受容体と協調して、受容体介在性エンドサイトーシス、リソソームへのトラフィッキング、上皮における栄養素の取り扱い、ならびに腎近位尿細管やその他の吸収性組織における細胞恒常性を制御する。レチノイドおよびビタミンD輸送、ソニックヘッジホッグ関連モルフォゲンの取り扱い、細胞外タンパク質クリアランスの調節といった経路との相互作用を通じて、LRP2は発生および代謝プロセスに影響を与える。LRP2の遺伝学的破綻や発現制御異常は、症候群性の発生異常や腎尿細管機能障害の表現型と関連づけられており、上皮生物学およびエンドサイトーシス・シグナル伝達の機構研究における重要性を裏づけている。

megalin/LRP2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LRP2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LRP2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LRP2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LRP2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。