megalin/LRP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401094-ACT

LRP2は、LDL受容体ファミリーに属する多リガンド性エンドサイトーシス受容体であるメガリンをコードしており、吸収上皮で高発現します。メガリンは、さまざまなタンパク質リガンド、ビタミン、ホルモン‐キャリア複合体を、クラスリン依存的に細胞内へ取り込む（内在化する）ことを仲介します。メガリン／LRP2は、受容体介在性取り込みとエンドソーム・リソソームへの輸送（トラフィッキング）を協調して制御し、上皮の極性、栄養恒常性、細胞外タンパク質のクリアランスに寄与します。また、cubilin/AMNが関与する経路、アルブミンやビタミンD結合タンパク質の取り扱い、ならびにリポタンパク質関連リガンドを含む経路と機能的に交差します。神経系やその他の組織では、LRP2は発生過程におけるSonic hedgehogやBMPの利用可能性（シグナルの届きやすさ）を調節するなど、モルフォゲンシグナル伝達の制御に関与すると報告されています。LRP2の遺伝学的または機能的な破綻は、症候群性の発生異常表現型や腎尿細管におけるタンパク質再吸収障害と関連しており、上皮輸送、発生シグナル、受容体トラフィッキングの研究において重要な標的です。

megalin/LRP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LRP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

megalin/LRP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LRP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLRP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性megalin/LRP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLRP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmegalin/LRP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLRP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmegalin/LRP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。