Plásmido CRISPR de Activación (h) MEF-2A: sc-400484-ACT

MEF2A codifica el factor de transcripción MEF-2A, un miembro de la familia del factor potenciador de miocitos 2, que se une a elementos MEF2 para regular programas de expresión génica específicos de tejido. MEF-2A integra la señalización dependiente de calcio y las vías MAPK, coordinando respuestas transcripcionales que influyen en la miogénesis, la regulación de genes dependiente de la actividad neuronal y funciones vasculares/endoteliales. Mediante interacciones con cofactores como las HDAC de clase IIa, MEF-2A vincula el estado de la cromatina con la transcripción sensible a estímulos y la diferenciación celular. Las alteraciones en la actividad de MEF2A se han asociado con fenotipos cardiovasculares y del neurodesarrollo, lo que respalda su uso como un nodo para estudios mecanísticos del control transcripcional en vías relevantes para la enfermedad.

MEF-2A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MEF2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MEF-2A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MEF2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MEF2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MEF-2A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MEF2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MEF-2A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MEF-2A en células tumorales con expresión de MEF2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.