Med10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407658-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Med10 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Med10ダブルニカースプラスミド（h）およびMed10ダブルニカースプラスミド（h2）は、MED10を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Med10 抗体 (C-2): sc-393450
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Med10 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407658-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Med10 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407658-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MED10はメディエーター複合体のサブユニットをコードしており、配列特異的転写因子と基本転写装置をつなぐことで、RNAポリメラーゼII依存的転写を統括する中心的な調整因子として機能します。Med10は、転写開始やシグナル依存的な遺伝子発現プログラムを制御するメディエーター各モジュールの構築と安定化に寄与します。これらの役割を通じて、MED10は増殖、分化、ストレス応答性の転写ネットワークなど、幅広い細胞プロセスに影響を与えます。メディエーター構成要素の機能異常は、発生異常やがんに関連する遺伝子発現シグネチャーにみられる転写制御の変化と関連しており、そのためMED10は転写制御機構を解明する研究において有用な標的（ノード）となります。
Med10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MED10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MED10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MED10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MED10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。