MDR1/ABCB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400178-ACT

ABCB1 (MDR1/P-glicoproteína) é um transportador da família ABC (ATP-binding cassette) que exporta uma ampla gama de xenobióticos e metabólitos endógenos através da membrana plasmática, moldando o acúmulo intracelular de fármacos e a função de barreira. É fortemente expresso em tecidos epiteliais e endoteliais, incluindo intestino, fígado, rim e a barreira hematoencefálica, onde contribui para a desintoxicação e a proteção tecidual. A atividade de MDR1/ABCB1 interage com processos farmacocinéticos e de resposta ao estresse ao limitar a exposição a compostos citotóxicos e influenciar a homeostase celular. A desregulação da expressão de ABCB1 tem sido amplamente associada a fenótipos de resistência a múltiplos fármacos em modelos de câncer e à variabilidade na resposta a medicamentos em contextos de doenças neurológicas e inflamatórias.

MDR1/ABCB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MDR1/ABCB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MDR1/ABCB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MDR1/ABCB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MDR1/ABCB1 em células tumorais com expressão de ABCB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.