MDFIC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421259

Panoramica

Il gene murino **Mdfic** codifica **MDFIC**, una proteina nucleare simile a un inibitore della famiglia MyoD, implicata nella regolazione della trascrizione e nella modulazione di programmi di espressione genica specifici di linea cellulare. È stato riportato che MDFIC influenzi l’attività dei fattori di trascrizione **bHLH** ed è collegato al controllo degli stati di differenziamento cellulare e degli output trascrizionali associati alla proliferazione. Attraverso questi ruoli regolatori, MDFIC può intersecarsi con vie che governano reti geniche dello sviluppo e risposte allo stress o alla crescita dipendenti dal contesto. In letteratura, alterazioni dell’espressione o della funzione di MDFIC sono state associate a una disregolazione del controllo trascrizionale rilevante per la biologia dei tumori e per fenotipi dello sviluppo, a supporto del suo valore come bersaglio di ricerca meccanicistica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MDFIC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mdfic in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mdfic insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mdfic a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MDFIC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mdfic per lo studio della segnalazione di MDFIC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mdfic critici per la funzione di MDFIC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mdfic per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MDFIC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MDFIC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mdfic. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MDFIC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MDFIC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mdfic per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mdfic definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.