MCT8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403824-ACT

SLC16A2 は、モノカルボン酸トランスポーター 8（MCT8）をコードしています。MCT8 は高親和性の細胞表面型甲状腺ホルモントランスポーターであり、トリヨードチロニン（T3）およびサイロキシン（T4）の取り込みと排出を担うことで、細胞内の甲状腺ホルモン利用可能量を調節します。ニューロンやグリア、その他の応答性細胞種へのホルモン流入を制御することにより、MCT8 は、神経発達、エネルギー代謝、細胞分化に影響する甲状腺ホルモン受容体依存的な転写プログラムの制御に寄与します。SLC16A2 の機能異常は、組織間での甲状腺ホルモン分布の破綻と関連しており、神経発達・神経学的表現型や、甲状腺ホルモンシグナルの不均衡モデルと強い関連性があります。研究の文脈では、MCT8 は膜輸送、内分泌系のクロストーク、ならびに T3 応答性経路によって駆動される下流の遺伝子発現ネットワークに関連して、しばしば解析対象となります。

MCT8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC16A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MCT8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC16A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC16A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MCT8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC16A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMCT8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC16A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMCT8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。