MCPIP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432978-ACT

O gene Zc3h12a do camundongo codifica a MCPIP (também conhecida como Regnase-1), uma RNase e desubiquitinase que restringe a expressão de genes inflamatórios ao promover a degradação de mRNAs de citocinas e quimiocinas. A MCPIP atua na interseção da sinalização imune inata, regulando as saídas das vias de NF-κB e MAPK e moldando os estados de ativação de macrófagos e células T. Ao limitar a magnitude e a duração das respostas imunes, Zc3h12a influencia a homeostase inflamatória e tem sido implicado em modelos de autoimunidade, inflamação tecidual e patologia mediada pelo sistema imune. Suas atividades de ligação a RNA e de edição de ubiquitina também conectam o controle pós-transcricional a programas de estresse e diferenciação relevantes para pesquisas em imunologia e biologia do câncer.

MCPIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zc3h12a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCPIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zc3h12a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zc3h12a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCPIP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zc3h12a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCPIP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCPIP em células tumorais com expressão de Zc3h12a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.