MCM8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413655

Panoramica

MCM8 codifica una proteina conservata della famiglia “minichromosome maintenance” che forma un complesso funzionale con MCM9, favorendo il completamento della replicazione del DNA e la riparazione mediata dalla ricombinazione omologa, in particolare durante il recupero dallo stress replicativo. MCM8 contribuisce alla resezione delle estremità del DNA e al processamento delle forcelle di replicazione bloccate o collassate, collegandosi così al mantenimento della stabilità del genoma sia durante la fase S sia nei contesti di ricombinazione meiotica. L’alterazione della funzione di MCM8 è stata associata a una riparazione compromessa delle rotture a doppio filamento, a un’aumentata instabilità cromosomica e a una maggiore suscettibilità a danni al DNA associati alla replicazione. Alterazioni genetiche di MCM8 sono state riportate in casi di infertilità e insufficienza ovarica precoce e sono rilevanti anche per studi meccanicistici della tumorigenesi guidata da difetti nelle vie di riparazione del DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MCM8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MCM8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MCM8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCM8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MCM8 per lo studio della segnalazione di MCM8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MCM8 critici per la funzione di MCM8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MCM8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MCM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MCM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MCM8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MCM8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MCM8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MCM8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MCM8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.