Plásmido CRISPR de Activación (h) MCM5: sc-401980-ACT

MCM5 codifica una subunidad esencial del complejo helicasa de mantenimiento de minicro-mosomas (MCM2–7), que licencia los orígenes de replicación e impulsa el desenrollamiento del ADN durante la fase S. Al coordinar la activación de los orígenes y la progresión de las horquillas de replicación, MCM5 ayuda a mantener la estabilidad del genoma y favorece transiciones ordenadas del ciclo celular a través de la replicación del ADN y las vías de control de puntos de control. La expresión desregulada de MCM5 se asocia con frecuencia a estados de hiperproliferación y a firmas de estrés replicativo observadas en múltiples contextos de investigación sobre cáncer e inestabilidad genómica. Su papel central en la síntesis de ADN también convierte a MCM5 en un nodo útil para estudiar los conflictos entre replicación y transcripción y las respuestas celulares ante horquillas detenidas.

MCM5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MCM5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MCM5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MCM5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MCM5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MCM5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MCM5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MCM5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MCM5 en células tumorales con expresión de MCM5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.