MC5-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403844-ACT

Il gene umano **MC5R** codifica il recettore della melanocortina 5 (MC5-R), un recettore accoppiato a proteine G attivato da peptidi melanocortinici derivati dal processamento di POMC. MC5-R si accoppia principalmente a **Gs** per stimolare l’adenilil ciclasi, aumentare i livelli di **cAMP** e attivare programmi trascrizionali dipendenti da **PKA/CREB**, con effetti a valle che possono intersecarsi con la segnalazione **MAPK** e con reti più ampie di regolazione dei GPCR. In contesti immunitari ed epiteliali, la segnalazione di MC5-R è stata collegata alla modulazione del tono infiammatorio, dell’attività secretoria e dell’omeostasi cellulare. Alterazioni dell’attività della via delle melanocortine sono state studiate in relazione alla biologia cutanea, alla regolazione metabolica e a fenotipi infiammatori, supportando l’uso di **MC5R** come nodo meccanicistico negli studi di mappatura delle vie di segnalazione.

MC5-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MC5R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MC5-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MC5R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MC5R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MC5-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MC5R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MC5-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MC5-R nelle cellule tumorali con espressione di MC5R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.