MC5-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403844-ACT

O MC5R humano codifica o receptor de melanocortina 5 (MC5-R), um receptor acoplado à proteína G ativado por peptídeos melanocortínicos derivados do processamento de POMC. O MC5-R acopla-se principalmente à Gs para estimular a adenilil ciclase, elevar o cAMP e acionar programas transcricionais dependentes de PKA/CREB, com efeitos a jusante que podem cruzar-se com a sinalização de MAPK e redes regulatórias mais amplas de GPCR. Em contextos imunes e epiteliais, a sinalização do MC5-R tem sido associada à modulação do tônus inflamatório, da atividade secretória e da homeostase celular. Alterações na atividade da via melanocortínica têm sido investigadas em relação à biologia da pele, à regulação metabólica e a fenótipos inflamatórios, apoiando o uso do MC5R como um nó mecanístico em estudos de mapeamento de vias.

MC5-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MC5R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MC5-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MC5R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MC5R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MC5-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MC5R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MC5-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MC5-R em células tumorais com expressão de MC5R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.