MC3-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403341-ACT

MC3R codifica o receptor de melanocortina 3 (MC3-R), um receptor acoplado à proteína G que responde a peptídeos melanocortínicos para regular a homeostase energética, a partição de nutrientes e a sinalização neuroendócrina. Após a ligação do ligante, o MC3-R acopla-se predominantemente à proteína Gs para aumentar o cAMP e ativar programas transcricionais dependentes de PKA/CREB, com efeitos a jusante sobre circuitos hipotalâmicos e o metabolismo periférico. A atividade de MC3R está ligada a vias que integram apetite, ritmos circadianos e comportamentos relacionados à alimentação, bem como sinais inflamatórios em tecidos metabólicos. Alterações genéticas e funcionais em MC3R têm sido associadas a fenótipos de regulação do peso corporal e disfunção metabólica, sustentando sua relevância em estudos sobre biologia da obesidade e características cardiometabólicas relacionadas.

MC3-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MC3R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MC3-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MC3R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MC3R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MC3-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MC3R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MC3-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MC3-R em células tumorais com expressão de MC3R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.