MBD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401072-ACT

ヒトMBD3はメチル化CpG結合ドメインタンパク質3をコードしており、ATP依存的なクロマチンリモデリングとヒストン脱アセチル化を統合して転写プログラムを制御するNuRD（ヌクレオソームリモデリング／脱アセチル化）複合体の中核構成要素です。MBD3は、プロモーターやエンハンサーにおける遺伝子の抑制／待機状態（poising）を調整し、クロマチンアクセシビリティに影響を与えることで、分化や多能性の移行を含む細胞同一性のエピジェネティックな制御に寄与します。クロマチン構造の制御という役割を通じて、MBD3はDNA損傷応答、複製タイミング、発生関連遺伝子ネットワークを司る経路とも交差します。NuRD/MBD3活性の破綻は、がんにおける異常な転写状態や神経発達に関わる表現型と関連付けられており、疾患に伴う遺伝子発現変化の基盤となるエピジェネティック機構の研究において重要です。

MBD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MBD3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MBD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MBD3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMBD3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MBD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMBD3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMBD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMBD3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMBD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。