MaxiKβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403096-ACT

KCNMB1 codifica a subunidade auxiliar β1 dos canais de potássio de grande condutância ativados por cálcio e voltagem (BK/MaxiK), comumente denominada MaxiKβ. Ao aumentar a sensibilidade do canal ao cálcio e modificar a cinética de abertura/fechamento (gating), a MaxiKβ ajusta a excitabilidade da membrana e o efluxo de potássio no músculo liso e em outros tecidos excitáveis, influenciando assim o tônus vascular, a reatividade das vias aéreas e o manejo celular de cálcio. Essa atividade moduladora relaciona a KCNMB1 a processos de sinalização que integram a dinâmica intracelular de Ca2+ com o potencial de membrana, incluindo vias que controlam o acoplamento contração–relaxamento e a hiperpolarização dependente de estímulo. Alterações na regulação dos canais BK e variações em KCNMB1 têm sido estudadas no contexto de fenótipos cardiovasculares e relacionados ao músculo liso, sustentando sua relevância para trabalhos mecanísticos sobre regulação de canais iônicos e biologia de doenças associadas à excitabilidade.

MaxiKβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNMB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MaxiKβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNMB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNMB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MaxiKβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNMB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MaxiKβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MaxiKβ em células tumorais com expressão de KCNMB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.