MATH-5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415110-ACT

ATOH7は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子MATH-5をコードしており、網膜神経新生の主要な調節因子として、網膜神経節細胞の運命獲得能（コンピテンス）と分化を促進すると同時に、より広範な神経系統の系譜決定にも影響します。MATH-5は、Notchシグナル伝達、神経新生性bHLH因子、さらに下流の軸索誘導および細胞周期離脱プログラムを含む発生期の転写ネットワークと統合され、神経細胞の仕様決定（スペシフィケーション）のタイミングを協調的に制御します。ATOH7の発現や機能の破綻は網膜発生の異常と関連し、先天性の視神経・網膜異常や、神経発達性の視覚障害に対する感受性とも関連づけられています。初期眼野のパターニングおよび神経細胞の運命決定における結節点として、ATOH7は感覚神経細胞形成を司る遺伝子制御回路の解析に広く用いられています。

MATH-5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATOH7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MATH-5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATOH7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATOH7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MATH-5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATOH7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMATH-5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATOH7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMATH-5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。