MATH-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404171-ACT

ATOH1（MATH-1とも呼ばれる）は、発生過程における細胞運命決定を規定する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子をコードしており、特に神経発生や感覚系系譜の分化で重要な役割を担います。前駆細胞のコミットメント（運命決定）、分化、成熟を制御する転写プログラムを調節することで、ATOH1はNotch依存性の側方抑制や、より広範なクロマチン駆動の系譜制限といった発生シグナル伝達ネットワークに組み込まれています。ATOH1の発現異常は、複数の組織環境において分化状態の変化や増殖性の表現型と関連づけられており、発生経路における転写制御を研究するための有用な結節点となります。ヒト細胞モデルでは、ATOH1の制御（発現の上げ下げ）により、発生に関わる遺伝子制御ネットワークの機構解析や、疾患に関連する細胞同一性の変化の研究が可能になります。

MATH-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATOH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MATH-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATOH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATOH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MATH-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATOH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMATH-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATOH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMATH-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。