MATE2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404811-ACT

ヒトのSLC47A2は、多剤・毒素排出トランスポーターであるMATE2（SLC47A2）をコードしており、上皮膜を介して内因性代謝産物および外因性（異物）由来のカチオン性化合物を排出する、電気的に中性な有機カチオン／H+逆輸送体である。MATE2は特に腎近位尿細管での輸送と強く関連しており、OCT2などの取り込みトランスポーターと協調して有機カチオンのベクトル輸送（方向性分泌）を担い、荷電化合物に対する細胞内曝露を規定する。カチオン性基質の細胞内蓄積を制御することで、SLC47A2は薬物動態の個体差、トランスポーター間相互作用、ならびに上皮輸送能の変化に伴うストレス応答に影響する。そのため、SLC47A2の発現異常や機能変異は、腎生理、薬物動態経路、そして実験モデルにおけるトランスポーター関連の腎障害表現型への感受性を扱う研究において重要である。

MATE2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC47A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MATE2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC47A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC47A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MATE2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC47A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMATE2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC47A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMATE2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。