Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
MAT Iα Double Nickaseプラスミド (h): sc-405476-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MAT Iα Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MAT Iαダブルニカースプラスミド（h）およびMAT Iαダブルニカースプラスミド（h2）は、MAT1Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MAT Iα Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405476-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MAT Iα Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405476-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAT1A は、肝臓で高発現する酵素であるメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ I アルファ（MAT Iα）をコードしており、メチオニンと ATP から S-アデノシルメチオニン（SAM）を生成する反応を触媒します。SAM は、DNA、RNA、タンパク質、脂質のメチル化反応における主要なメチル基供与体です。MAT Iα は細胞内の SAM 利用可能量を制御することで、メチオニン代謝および一炭素代謝を、エピジェネティック制御、レドックス恒常性、ポリアミン生合成と結び付けます。MAT1A の発現や活性が変化すると、メチル化能や代謝フラックスが乱れる可能性があり、これらは肝機能障害、代謝リプログラミング、メチル化関連表現型を扱う研究で頻繁に検討される過程です。そのため MAT1A は、ヒト細胞における栄養感知、クロマチン状態、ならびに下流の転写プログラムとの関連を解析する目的で広く用いられています。
MAT Iα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAT1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAT1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAT1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAT1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。