CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
Mast Cell Chymase Double Nickaseプラスミド (h): sc-403686-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Mast Cell Chymase Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Mast Cell Chymaseダブルニカースプラスミド（h）およびMast Cell Chymaseダブルニカースプラスミド（h2）は、CMA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Mast Cell Chymase 抗体 (CC1): sc-59586
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Mast Cell Chymase Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403686-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mast Cell Chymase Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403686-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CMA1 は、肥満細胞の脱顆粒時に放出され、炎症反応や組織リモデリング反応を形成する顆粒関連セリンプロテアーゼである肥満細胞キマーゼをコードしている。ヒトキマーゼは、血管作動性ペプチドやサイトカイン前駆体など多様な基質を切断することで、細胞外マトリックスの代謝回転や局所シグナル伝達に寄与し、血管周囲の微小環境におけるプロテアーゼ活性化経路およびレニン–アンジオテンシン関連経路に影響を及ぼす。キマーゼ活性の異常は、アレルギー性炎症や慢性的な線維化性リモデリング過程と関連づけられており、肥満細胞由来プロテアーゼが白血球の遊走、血管透過性、間質細胞の活性化を調節する。こうした理由から、CMA1 は気道および心血管系の生物学、線維化・炎症性シグナル伝達ネットワーク、ならびに肥満細胞駆動性病態の機序に関する研究でしばしば対象となる。
Mast Cell Chymase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CMA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CMA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CMA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CMA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。