MAS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401674-ACT

MAS1（MAS1プロトオンコジーン、Gタンパク質共役型受容体）は、Mas受容体をコードする。この受容体は7回膜貫通型のGPCRであり、アンジオテンシン-(1–7)の下流シグナル伝達を介して、レニン–アンジオテンシン系の保護的アームの中核的構成要素として機能する。MAS1の活性化は、一酸化窒素やプロスタグランジン関連シグナルなどを含む、GPCR依存性のセカンドメッセンジャー経路を調節し、その下流で血管緊張、炎症シグナル、組織リモデリングに影響を及ぼす。ヒト細胞においてMAS1活性は、内皮機能を制御する経路、線維化に関連する転写プログラム、ならびに心血管・代謝恒常性を担う経路と交差する。MAS1の発現やシグナル伝達の破綻は、心血管および腎疾患の病態、炎症状態、がん関連シグナルネットワークなどの文脈で研究されており、経路解析のための機序的ターゲットとしての重要性が示唆されている。

MAS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MAS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MAS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMAS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMAS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。