MAGI-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404260-ACT

MAGI2は、タイトジャンクションおよびシナプス区画に局在し、シグナル伝達複合体の組織化と細胞間接着の安定化に関与する、多数のPDZドメインを有する足場タンパク質MAGI-2をコードします。MAGI-2は、膜関連受容体と細胞骨格アダプターの集合を協調して制御し、上皮バリア機能や神経細胞間の結合性に関連する、ジャンクションの完全性、極性、ならびにシグナル伝達経路に影響を及ぼします。さらに、ホスファターゼやシグナル伝達中間体を足場として固定する役割を通じて、増殖、分化、シナプスシグナルの動態に影響する経路を調節します。MAGI2の制御異常は、ジャンクション構造の変化や異常なシグナル伝達ネットワークと関連することが示されており、神経発生や腫瘍学関連の文脈で研究されています。

MAGI-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAGI2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MAGI-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAGI2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAGI2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MAGI-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAGI2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMAGI-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAGI2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMAGI-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。