Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
MAGI-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402283
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MAGI-1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MAGI-1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MAGI-1 Antibody (SS-5): sc-100326
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MAGI-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402283 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MAGI1 codifica MAGI-1, una proteina scaffold della famiglia delle guanilato chinasi associate alla membrana (MAGUK), arricchita nelle tight junction e in altri siti di contatto cellula–cellula, dove organizza complessi multiproteici di segnalazione. Legandosi a componenti giunzionali ed effettori di segnalazione tramite domini PDZ e WW, MAGI-1 contribuisce a coordinare la polarità epiteliale, la stabilità delle giunzioni aderenti e delle tight junction e la regolazione spaziale di vie correlate al rimodellamento del citoscheletro e alla trasduzione del segnale. Alterazioni dell’espressione di MAGI1 o della sua localizzazione giunzionale sono state associate alla compromissione della funzione di barriera e a programmi aberranti di migrazione cellulare, processi frequentemente studiati nella biologia del cancro e nel rimodellamento tissutale infiammatorio. MAGI-1 è anche utilizzata come nodo per indagare il cross-talk tra l’architettura giunzionale e le reti di segnalazione responsive ai fattori di crescita.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGI-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAGI1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAGI1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAGI1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAGI-1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAGI1 per lo studio della segnalazione di MAGI-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MAGI1 critici per la funzione di MAGI-1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAGI1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MAGI-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MAGI-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAGI1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MAGI-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MAGI-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAGI1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAGI1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.