MAGI-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402283

概要

MAGI1は、タイトジャンクションやその他の細胞間接着部位に多く存在し、複数のタンパク質からなるシグナル伝達複合体を組織化する、膜関連グアニル酸キナーゼ（MAGUK）ファミリーの足場（スキャフォールド）タンパク質MAGI-1をコードしています。MAGI-1はPDZドメインおよびWWドメインを介して接着部位の構成因子やシグナル伝達エフェクターに結合し、上皮の極性、アドヘレンス／タイトジャンクションの安定性、ならびに細胞骨格のリモデリングやシグナル伝達に関連する経路の空間的制御を協調的に調整します。MAGI1の発現量や接着部位への局在の変化は、バリア機能の破綻や異常な細胞移動プログラムと関連づけられており、これらはがん生物学や炎症性の組織リモデリングで頻繁に研究されるプロセスです。さらにMAGI-1は、接着構造と増殖因子応答性のシグナル伝達ネットワーク間のクロストークを解析するための結節点としても用いられます。

MAGI-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMAGI1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAGI1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MAGI1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MAGI-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MAGI-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAGI1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MAGI-1の機能に不可欠なMAGI1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MAGI1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MAGI-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMAGI-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAGI1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MAGI-1 HDRプラスミド（h）および MAGI-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMAGI1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAGI1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。