MAGE-A3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402571-ACT

MAGEA3は、がん精巣抗原であるMAGE-A3をコードする遺伝子であり、成人の体細胞組織では通常サイレンシングされていますが、エピジェネティックな制御破綻により複数の悪性腫瘍で誘導され得ます。MAGE-A3は、E3ユビキチンリガーゼ活性を調節し得るMAGEファミリーのシグナル伝達モジュールに関与することで、転写制御やプロテオスタシス制御に寄与し、タンパク質のターンオーバー、ストレス応答、細胞周期関連プログラムに影響を与えることが示唆されています。その発現は抗原提示や免疫認識の状態変化と関連づけられることが多く、腫瘍関連の遺伝子制御を研究するための有用な分子指標となります。系譜特異性が高く疾患関連性の強いマーカーとして、MAGEA3はヒト細胞におけるクロマチン制御、転写再活性化、ならびに下流経路の再編成を検討するためのモデル座位として位置づけられています。

MAGE-A3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAGEA3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MAGE-A3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAGEA3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAGEA3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MAGE-A3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAGEA3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMAGE-A3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAGEA3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMAGE-A3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。