Mad 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401812-ACT

O gene humano **MXD1** codifica **Mad1**, um fator de transcrição **bHLH-LZ** (hélice-alça-hélice básica com zíper de leucina) que forma heterodímeros com **MAX** para antagonizar a expressão gênica dirigida por **MYC**. Ao se ligar a elementos **E-box** e recrutar complexos correpressores, Mad1 contribui para programas de repressão transcricional que promovem a diferenciação, restringem a proliferação e influenciam a progressão do ciclo celular e a apoptose. **MXD1** integra a rede regulatória **MYC/MAX/MXD**, que conecta a sinalização mitogênica ao controle de cromatina e da transcrição. A desregulação desse eixo é frequentemente implicada na biologia do câncer, tornando **MXD1** um nó útil para estudar circuitos transcricionais oncogênicos e estados de diferenciação específicos de linhagem.

Mad 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MXD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mad 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MXD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MXD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mad 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MXD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mad 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mad 1 em células tumorais com expressão de MXD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.