mAChR M4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402318-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- mAChR M4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- mAChR M4ダブルニカースプラスミド（h）およびmAChR M4ダブルニカースプラスミド（h2）は、CHRM4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
mAChR M4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM4は、ヒトのムスカリン性アセチルコリン受容体M4（mAChR M4）をコードする。mAChR M4はGi/o共役型のGPCRであり、アデニル酸シクラーゼを抑制して細胞内cAMPを低下させ、さらにイオンチャネル活性を調節することで神経細胞の興奮性やシナプス伝達を形成する。mAChR M4のシグナル伝達はコリン作動性およびドパミン作動性回路と交差し、cAMP/PKAやMAPK/ERKなどの下流経路にも影響を及ぼすことで、神経伝達物質放出や可塑性の制御に寄与する。CHRM4の発現異常や受容体機能の変化は、統合失調症、パーキンソン病の回路、物質使用に関連する行動などに関わる機序を含め、神経精神疾患および神経変性疾患の病態生物学との関連が示唆されている。これらの特性により、CHRM4はヒトモデル系において、GPCRシグナル伝達、ネットワークレベルの神経調節、ならびに受容体依存的な転写・電気生理学的表現型を解析するための有用な標的となる。
mAChR M4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRM4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRM4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRM4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRM4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。