Plásmido CRISPR de Activación (h) MACC1: sc-404253-ACT

MACC1 humano (metastasis associated in colon cancer 1) codifica un regulador transcripcional implicado en el control de la motilidad celular, el crecimiento invasivo y los programas de supervivencia. MACC1 está estrechamente vinculado a la señalización HGF/MET y a la actividad de las vías PI3K–AKT y MAPK aguas abajo, coordinando cambios en la expresión génica que favorecen fenotipos tipo transición epitelio-mesénquima y la remodelación de la dinámica del citoesqueleto y de la adhesión. La alteración de la expresión de MACC1 se ha asociado con la progresión tumoral y el comportamiento metastásico en múltiples neoplasias sólidas, lo que lo convierte en un nodo molecular útil para estudiar redes transcripcionales que acoplan la detección de factores de crecimiento con la migración. Por ello, su regulación y sus dianas aguas abajo se investigan con frecuencia en modelos de biología del cáncer, incluidos estudios de invasión, firmas transcripcionales asociadas a metástasis y el entrecruzamiento de vías de señalización.

MACC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MACC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MACC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MACC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MACC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MACC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MACC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MACC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MACC1 en células tumorales con expresión de MACC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.