M33 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402604-ACT

CBX2 codifica a proteína do grupo Polycomb M33, um componente da família chromobox do complexo repressivo Polycomb canônico 1 (PRC1), que reconhece H3K27me3 e ajuda a manter o silenciamento transcricional por meio da compactação da cromatina e da ubiquitinação da histona H2A. Ao impor programas estáveis de repressão epigenética, CBX2 contribui para a especificação do destino celular, o controle de genes do desenvolvimento e a regulação de redes transcricionais associadas à proliferação. A expressão desregulada de CBX2 ou a atividade do PRC1 está ligada a estados de diferenciação alterados e a programas transcricionais oncogênicos em múltiplos contextos tumorais, tornando-o um alvo útil para estudar mecanismos epigenéticos de regulação gênica relevantes para doenças. CBX2/M33 também se integra a vias mais amplas de regulação da cromatina coordenadas pela metilação de H3K27 mediada pelo PRC2 e por outros leitores e escritores de modificações de histonas.

M33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CBX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

M33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CBX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CBX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de M33. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CBX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de M33 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via M33 em células tumorais com expressão de CBX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.