M33 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402604-ACT

CBX2は、ポリコーム群タンパク質M33をコードしている。M33はクロモボックス（Chromobox）ファミリーに属し、H3K27me3を認識するカノニカルなポリコーム抑制複合体1（PRC1）の構成要素で、クロマチンの凝縮およびヒストンH2Aのユビキチン化を通じて転写サイレンシングの維持に寄与する。安定したエピジェネティック抑制プログラムを確立することで、CBX2は細胞運命の決定、発生関連遺伝子の制御、ならびに増殖に関連する転写ネットワークの調節に関与する。CBX2の発現異常やPRC1活性の破綻は、複数の腫瘍コンテキストにおいて分化状態の変化や腫瘍性の転写プログラムと関連しており、疾患関連の遺伝子制御におけるエピジェネティック機構を研究するうえで有用な標的となる。CBX2/M33はまた、PRC2によるH3K27メチル化や、他のヒストン修飾のリーダー／ライターによって協調的に制御される、より広範なクロマチン調節経路とも交差している。

M33 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CBX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

M33 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CBX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCBX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性M33の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCBX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるM33依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCBX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるM33経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。