LYVE-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401446-ACT

LYVE1 は、リンパ管内皮ヒアルロン酸受容体 1（LYVE-1）をコードしており、ヒアルロン酸に結合する I 型膜貫通糖タンパク質です。LYVE-1 はリンパ管内皮としてのアイデンティティ、細胞外マトリックスとの相互作用、ならびに白血球の輸送に寄与します。LYVE-1 はリンパ管内皮のマーカーとして一般的に用いられ、特殊なマクロファージ集団でも検出されることから、組織の体液恒常性や免疫細胞移動の研究を支えています。ヒアルロン酸依存的な接着およびエンドサイトーシス関連過程を介して、LYVE-1 はグリコカリックスの再構築を血管および間質の微小環境ダイナミクスと結び付けます。LYVE1 の発現パターンの破綻は、リンパ管新生、慢性炎症、腫瘍関連のリンパ管リモデリングといった文脈で検討されており、臨床的転帰を示唆することなく、転移に関連する経路に関する機序研究に情報を与えます。

LYVE-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LYVE1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LYVE-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LYVE1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLYVE1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LYVE-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLYVE1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLYVE-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLYVE1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLYVE-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。