Ly-6D Double Nickaseプラスミド (h): sc-407742-NIC

LY6Dは、上皮系譜の決定や免疫関連の細胞表現型に関与するとされるLy6/uPARスーパーファミリーに属する、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞表面タンパク質Ly-6Dをコードします。Ly-6Dは細胞間相互作用に関わるプログラムに参与し、分化、接着、膜マイクロドメインの構築に関連するシグナル伝達ネットワークに影響を及ぼし得ます。LY6Dの発現異常は複数の腫瘍文脈で報告されており、上皮性または系譜制限された状態のマーカーとして評価されることも多いため、腫瘍の不均一性や細胞状態の遷移を研究するうえで重要です。加えて、GPIアンカー型タンパク質が形質膜上で受容体の近接性や下流経路の応答性をどのように調節するかを検討する上でも、LY6Dの生物学的特性は関心の対象となっています。

Ly-6D ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LY6D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LY6D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LY6Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LY6Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。