LTBP-4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405419-ACT

LTBP4は、潜在型トランスフォーミング成長因子β結合タンパク質4（LTBP-4）をコードする。LTBP-4は細胞外マトリックスの糖タンパク質であり、潜在型TGF-β複合体に結合して、細胞周囲空間におけるその隔離、安定化、および制御された活性化を統括する。フィブリリン微小線維やエラスチン関連アセンブリとの相互作用を介して、LTBP-4は弾性線維形成とマトリックス組織化を支え、メカノトランスダクションや組織リモデリングを形作る。LTBP-4依存的なTGF-βのバイオアベイラビリティ制御は、本遺伝子をSMADシグナル伝達のダイナミクスと結び付け、線維芽細胞の挙動、上皮―間葉間のクロストーク、ならびに創傷修復プログラムに影響を及ぼす。LTBP4の発現または機能の変化は、結合組織および肺の表現型と関連しており、細胞外マトリックス恒常性やTGF-β駆動性病態の研究における重要性を示している。

LTBP-4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LTBP4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LTBP-4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LTBP4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLTBP4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LTBP-4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLTBP4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLTBP-4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLTBP4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLTBP-4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。