LT-β Double Nickaseプラスミド (h): sc-404663-NIC

リンホトキシンβ（LT-β）はヒトのLTB遺伝子にコードされるTNFスーパーファミリーのII型膜タンパク質で、リンホトキシンαと会合してLTα1β2ヘテロ三量体を形成し、主としてリンホトキシンβ受容体（LTβR）を介してシグナルを伝達する。この軸はカノニカルおよびノンカノニカルNF-κB経路を活性化し、リンパ組織の形成、間質細胞と免疫細胞のクロストーク、ケモカインネットワーク、ならびに獲得免疫を支える組織微小環境の維持を制御する。LTBは二次リンパ組織構造や粘膜免疫応答の組織化にも寄与し、抗原提示のニッチや白血球のトラフィッキング・プログラムに影響を与える。LTβRシグナル伝達の破綻は慢性炎症、自己免疫様表現型、腫瘍関連の免疫リモデリングに関与するとされており、LTBは免疫学およびがん生物学における機序研究の重要な結節点となっている。

LT-β ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LTB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LTB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LTBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LTBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。