LSM8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404816-ACT

ヒトLSM8は、Sm様のRNA結合タンパク質をコードしており、U6小核リボヌクレオタンパク質（snRNP）およびLSm2–8リングの中核構成要素として機能します。これにより、U6 snRNAの安定性、snRNPの生合成、ならびにpre-mRNAスプライシングにおけるスプライソソームの組み立てが支えられます。こうした機能を通じて、LSM8はイントロンの正確な除去とトランスクリプトームの完全性に寄与し、細胞周期の進行やストレス応答性遺伝子発現プログラムを形作るRNAプロセシング・ネットワークとの関連が示唆されます。スプライソソームやsnRNPの恒常性の破綻は、さまざまな疾患状況において異常なmRNAアイソフォームや遺伝子発現の制御異常と広く関連しており、LSM8はスプライシング依存的表現型の機構研究に有用な結節点となります。また、RNA代謝における必須の役割は、コアとなるスプライシング因子が細胞状態やプロテオーム多様性にどのように影響するかを検証するための明確な足がかりも提供します。

LSM8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LSM8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LSM8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LSM8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLSM8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LSM8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLSM8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLSM8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLSM8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLSM8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。