Lsh CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402466-ACT

ヒトのHELLSは、リンパ系特異的ヘリカーゼ（Lsh）をコードしており、SNF2ファミリーに属するATP依存性クロマチンリモデリング因子である。LshはDNAメチルトランスフェラーゼと協調して、DNAメチル化とヘテロクロマチン構造の確立および維持に関与する。Lshはヌクレオソーム配置と高次クロマチン構造を制御することで、複製に共役したクロマチンアセンブリー、周動原体反復配列のサイレンシング、ならびにゲノム安定性を支える。これらのエピジェネティック機能を介して、HELLSは細胞周期進行や分化を制御する転写プログラムに影響を及ぼし、その制御異常は、複数の疾患状況において観察されるメチル化景観の変化やゲノム不安定性の表現型と関連する。そのためHELLSは、エピジェネティック継承、トランスポゾン抑制、DNA修復に連動したクロマチンリモデリングを司る経路において広く研究されている。

Lsh CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HELLSの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Lsh CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HELLS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHELLS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Lshの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHELLS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLsh依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHELLS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLsh経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。