LRRC59 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404821-ACT

LRRC59 (leucine rich repeat containing 59) codifica uma proteína de membrana associada ao retículo endoplasmático e ao envelope nuclear, implicada no direcionamento de proteínas e no tráfego associado a membranas na face citoplasmática do RE. O LRRC59 tem sido relacionado ao recrutamento de ribossomos e a processos cotraducionais que sustentam a biogênese de proteínas secretadas e de membrana, conectando-o às redes de homeostase do RE e de proteostase. Por sua localização na interface entre o RE e o envelope nuclear, o LRRC59 também é estudado no contexto da organização núcleocitoplasmática e da remodelação do sistema endomembranar em resposta ao estresse. A desregulação da proteostase no RE e programas de tráfego alterados são características recorrentes em pesquisas sobre câncer e neurodegeneração, o que torna o LRRC59 um nó útil para dissecar alterações em nível de vias nesses processos relevantes para doenças.

LRRC59 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRRC59 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRRC59 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRRC59 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRRC59, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRRC59. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRRC59 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRRC59 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRRC59 em células tumorais com expressão de LRRC59 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.