LRP1B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404088-ACT

LRP1B（LDL受容体関連タンパク質1B）は、LDL受容体ファミリーに属する大型のエンドサイトーシス受容体であり、受容体介在性による細胞外リガンドの取り込みや、細胞表面に存在するプロテアーゼおよび増殖因子の利用可能性の調節に関与します。エンドサイトーシスや膜タンパク質のターンオーバーに及ぼす作用を通じて、LRP1Bは脂質の取り扱い、細胞外マトリックスのリモデリング、ならびに細胞接着や遊走に関連するシグナル伝達経路に影響を与え得ます。LRP1Bの発現変化やゲノム異常は、複数のがん関連データセットで報告されており、腫瘍の進化、浸潤、免疫関連の特徴との関係で研究されています。さらに、神経系および心血管・代謝領域の生物学的役割にも関心が寄せられています。その結果、LRP1Bは、疾患機序に関連する細胞内取り込み過程や微小環境シグナルの制御因子として、しばしば解析対象となっています。

LRP1B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LRP1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LRP1B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LRP1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLRP1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LRP1Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLRP1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLRP1B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLRP1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLRP1B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。