LOXL1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401965-NIC

LOXL1は、銅依存性アミン酸化酵素であるリシルオキシダーゼ様1（lysyl oxidase–like 1）をコードしており、エラスチンおよびコラーゲン中のリジン残基の酸化的脱アミノ化を触媒することで、共有結合性の架橋形成と細胞外マトリックスの成熟を促進します。エラスチン形成（エラストジェネシス）やコラーゲン線維形成（フィブリロジェネシス）の調節を通じて、LOXL1は組織の機械的安定性、細胞―マトリックス間シグナル伝達、ならびに創傷修復や線維化関連経路に結びつくリモデリング過程に寄与します。LOXL1の活性または発現の変化は、落屑症候群／落屑緑内障や結合組織のリモデリング表現型などの疾患でみられる細胞外マトリックス恒常性の破綻と関連づけられています。がん生物学および間質研究の分野では、LOXL1はマトリックス構造の制御における役割や、浸潤を許容する微小環境への潜在的影響という観点から研究されています。

LOXL1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LOXL1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LOXL1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LOXL1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LOXL1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。