Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LOK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405859
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LOK Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico LOK, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LOK Antibody (D-6): sc-398083
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LOK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405859 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La serina/treonina-proteina chinasi 10 (STK10), nota anche come chinasi orientata ai linfociti (LOK), è una chinasi della famiglia STE20 che regola l’organizzazione del citoscheletro e la polarità cellulare attraverso eventi di fosforilazione che influenzano la dinamica dell’actina e la funzione delle proteine ERM (ezrina–radixina–moesina). Nelle cellule immunitarie, LOK contribuisce all’adesione e alla migrazione dei linfociti, nonché all’architettura della sinapsi immunologica, collegando la segnalazione recettoriale al rimodellamento dell’actina corticale. L’attività di STK10 si interfaccia con vie dipendenti dalle GTPasi della famiglia Rho e con reti di segnalazione più ampie che coordinano motilità e traffico tissutale. Una segnalazione citoscheletrica deregolata e un controllo aberrante del movimento cellulare mediato da chinasi sono stati associati a disfunzioni immunitarie e a fenotipi legati al cancro, rendendo STK10 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LOK (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STK10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STK10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STK10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LOK.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STK10 per lo studio della segnalazione di LOK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni STK10 critici per la funzione di LOK
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STK10 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal LOK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LOK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STK10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal LOK Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LOK (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STK10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STK10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.