LMO4 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421448-NIC

Lmo4は、LIMドメインのみを持つ4（LMO4）をコードしており、LMO4は核内に存在するLIM-only型のアダプタータンパク質として、多タンパク質からなる転写複合体の形成を担い、状況依存的な遺伝子発現プログラムを調節します。マウス組織においてLMO4は、LIM結合パートナーや他の転写制御因子との相互作用を協調させることで、発生パターン形成や細胞運命決定に寄与し、分化、増殖、神経機能などの過程に影響を与えます。LMO4は、転写制御やシグナル統合を司る経路（上皮および神経の発生に関与するネットワークを含む）との関連も示されています。LMO4活性の破綻は、腫瘍形成モデルや神経発達表現型モデルで観察される異常な転写制御と関連づけられており、遺伝子制御研究における機構的な結節点としての有用性を支持します。

LMO4 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Lmo4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Lmo4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Lmo4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Lmo4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。