Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) LIMP II: sc-402532-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LIMP II correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LIMP II Double Nickase (h) et le plasmide LIMP II Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SCARB2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LIMP II Antibody (D-3): sc-55570
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LIMP II | sc-402532-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LIMP II | sc-402532-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCARB2 code la protéine intégrale de membrane lysosomale 2 (LIMP II), une glycoprotéine membranaire de type III qui soutient le trafic endolysosomal et la biogenèse des lysosomes. LIMP II agit comme récepteur de tri pour la glucocérébrosidase et contribue au catabolisme des lipides, à la stabilité de la membrane lysosomale et au renouvellement associé à l’autophagie. SCARB2 est également impliqué dans les voies d’internalisation médiées par des récepteurs et peut influencer les processus d’entrée virale via le routage endosomal. La dérégulation de SCARB2/LIMP II a été associée à des phénotypes de surcharge lysosomale et liés à la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la protéostasie dépendante du lysosome et des réponses au stress métabolique.
LIMP II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SCARB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SCARB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SCARB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SCARB2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.