LIGHT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424539

Panoramica

Il gene murino *Tnfsf14* codifica LIGHT (TNFSF14), una citochina della superfamiglia TNF che agisce come ligando, sia associato alla membrana sia solubile, per HVEM (TNFRSF14) e LTβR, coordinando una segnalazione bidirezionale tra i compartimenti immunitario e stromale. Il legame di LIGHT attiva le vie di NF-κB e MAPK per modulare la costimolazione delle cellule T, la funzione delle cellule dendritiche e l’organizzazione dei tessuti linfoidi, con effetti a valle sulla produzione di citochine e sul traffico dei leucociti. Un’alterata regolazione della segnalazione di LIGHT è stata implicata in fenotipi infiammatori e autoimmuni, nonché nelle interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendola un nodo utile per studiare la regolazione immunitaria e l’infiammazione tissutale nei modelli murini. Inoltre, *Tnfsf14* contribuisce alle risposte di barriera e vascolari attraverso programmi dipendenti da LTβR che modellano i microambienti locali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LIGHT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfsf14 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfsf14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfsf14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LIGHT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfsf14 per lo studio della segnalazione di LIGHT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnfsf14 critici per la funzione di LIGHT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfsf14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LIGHT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LIGHT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfsf14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LIGHT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LIGHT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfsf14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfsf14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.