LHX9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403360-ACT

LHX9（LIM homeobox 9）は、LIMドメインを持つ転写因子をコードしており、系譜特異的な遺伝子発現プログラムを制御することで、胚発生期における細胞運命決定を調節します。ヒト生物学では、LHX9の活性は発生過程の神経系および性腺組織におけるパターニングや分化プロセスに関連しており、厳密な時間的制御を伴う転写調節が必要とされます。DNA結合性の制御因子として、LHX9はクロマチンおよび転写ネットワークと相互に作用して発生経路を形作り、その発現異常は、分化制御の破綻や腫瘍性の転写状態といった文脈で研究されています。これらの特性により、LHX9は遺伝子制御回路、発生関連転写因子、ならびに内因性転写の変化によって駆動される表現型変調を研究するための有用な標的となります。

LHX9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LHX9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LHX9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LHX9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLHX9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LHX9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLHX9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLHX9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLHX9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLHX9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。