LHX2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401071-NIC

LHX2は、発生過程における系譜指定、前駆細胞の維持、ならびに組織パターニングを制御するLIMホメオボックス型転写因子をコードします。LHX2は、DNA結合とLIMドメインを介したタンパク質間相互作用によって機能し、クロマチン制御、細胞運命決定、分化に関わる転写プログラムを、神経系・眼組織・造血系といった文脈で統合的に調整します。成体組織では、LHX2発現の変化が、発生関連遺伝子ネットワークの制御異常や、異常な増殖・分化状態と関連づけられています。文脈依存的な制御因子として、LHX2は幹細胞生物学、神経発生経路、ならびに疾患関連の遺伝子発現シグネチャーに関わる転写制御機構における役割の観点から、しばしば研究対象となっています。

LHX2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LHX2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LHX2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LHX2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LHX2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。