LHX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421425-ACT

O gene Lhx2 de camundongo codifica o fator de transcrição homeobox LIM LHX2, um regulador nuclear que controla a especificação do destino celular, o padrão de formação dos tecidos e a manutenção da competência de progenitores durante o desenvolvimento embrionário e pós-natal. O LHX2 participa de programas transcricionais que moldam a neurogênese e a arealização cortical, sustentam o desenvolvimento da retina e influenciam decisões de estado epitélio–mesênquima por meio de interações dependentes do contexto com cofatores e reguladores de cromatina. Em compartimentos de células-tronco e progenitoras, a atividade de LHX2 contribui para a restrição de linhagem, o timing de diferenciação e a sobrevivência, conectando-o a vias que governam redes transcricionais do desenvolvimento e a acessibilidade da cromatina. A expressão desregulada de LHX2 tem sido associada a defeitos do desenvolvimento e a estados proliferativos alterados em modelos relevantes para doenças, tornando-o um nó útil para dissecar circuitos de regulação gênica em neurociência e biologia do desenvolvimento.

LHX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lhx2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LHX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lhx2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lhx2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LHX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lhx2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LHX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LHX2 em células tumorais com expressão de Lhx2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.